Динамика морфологических изменений эритроцитов и биохимических показателей консервированной цельной крови в различные сроки хранения

Цель работы : изучение закономерностей биохимических изменений крови, динамики пойкилоцитоза и нарушений ультраструктуры мембран эритроцитов цельной крови, консервированной в ЦФДА-1 (CPDA-1), в процессе длительного хранения. Материал и методы. Исследовалась цельная кровь, полученная от 5 доноров в возрасте 25±3 лет разного пола, хранившаяся при +2…+4°С. На 1-е, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки хранения оценивали морфологический состав популяции эритроцитов в монослойных мазках крови — 1000 клеток на мазок при использовании микроскопа Olympus BX-500, компьютера и программы ImageScopeM. Поверхность мембран эритроцитов анализировали с помощью атомного силового микроскопа (АСМ): «IntegraPrima» NT — MDT. Биохимический состав крови исследовали с помощью анализатора: «i-stat 1® analyzer M: 300». Статистическую обработку производили с использованием программы STATISTICA 7. Результаты. Выявлено изменение биохимического состава цельной крови уже в первые сутки хранения. а именно: достоверно уменьшается гематокрит, содержание гемоглобина, ионов натрия и кальция, существенно увеличивается концентрация глюкозы (до 700 мг/дл). Морфологические изменения эритроцитов наблюдаются через 3-е суток. К 21 суткам число дискоцитов в крови составляет 31,3±3,27% (р<0,0001) относительно контроля (первых суток). Через 30 суток хранения обнаруживается более 80% измененных эритроцитов, среди которых преобладают эхиноциты (79,6±2,74%, p<0,0001). Исследования с использованием АСМ проиллюстрировали, что по мере хранения наноструктура мембран эритроцитов существенно изменяется: появляются локальные повреждения (выросты различных размеров), трансформируемые в крупные спикулы. Заключение. Проведенные исследования биохимических показателей крови, морфологических характеристик эритроцитов и их мембран свидетельствуют о развитии изменений, начиная с первых суток хранения крови. Полученные данные представляются существенными для разработки новых способов консервации крови и ее компонентов. Ключевые слова: кровь, эритроциты, ЦФДА-1.

blood, red blood cells, citrate-phosphate-dextrose-adenine-1.

1. Об утверждении технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии. Постановление Правительства РФ №29 от 26 января 2010 г.

2. О донорстве крови и ее компонентов. Федеральный закон Российской Федерации №125-ФЗ от 20 июля 2012 г.

3. Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components. Recommendation N.R (95) 15. 16thedition. Council of Europe, 2010.

4. КраснокутскийЮ. А., КопченкоТ. Г.Аутогемотрансфузия как альтернатива донорской крови в плановой хирургии.Мед. вестн. Северного Кавказа.2007; 8 (4): 14—17.

5. Лаптев В. В., Селиванов Е. А.Значение микроагрегатов донорской крови и ее компонентов в развитии посттрансфузионных осложнений и возможные способы их профилактики.Вестн. службы крови России.2010; 1: 47—54.

6. Фирсов Н. Н., Сирко И. В., Приезжев А. В.Современные проблемы агрегатометрии цельной крови.Тромбоз, гемостаз, реология.2000; 2 (2): 9—11.

7. Селиванов Е. А., Бессмельцев С. С, Дуткевич И. Г., Данилова И. Г., Лаврова В. А., Чечеткин А. В., Красняков В. К, Щелкунова Л. В, Дег-терева И. Н., Григорьян М. Ш.Современные проблемы донорства в Российской Федерации.Вестн. службыкровиРоссии.2011; 1: 5—14.

8. Spinella P. C., Strandenes G., Rein E. B., SeghatchianJ., Hervig T.Symposium on fresh whole blood for severe hemorrhagic shock: from in-hospital to far forward resuscitations.Transfus. Apher. Sci.2012; 46 (1): 113—117.

9. Зинчук В. В.Кислородосвязывающие свойства крови: фундаментальные и прикладные успехи.Вестник Тверского государственного университета. Серия: Биология и экология.2010; 17 (16): 7—15.

10. Мороз В. В., Голубев А. М., Афанасьев А. В., Кузовлев А. Н., Сергуно-ва В. А., Гудкова О. Е., Черныш А. М.Строение и функция эритроцита в норме и при критических состояниях (обзор).Общая реаниматология.2012; 8 (1): 53—61.

11. Мороз В. В., Кирсанова А. К., Новодержкина И. С., Александрин В. В., Назарова Г. А.Мембранопротекторное действие перфторана на эритроциты при острой кровопотере.Общая реаниматология.2011; 7 (1): 5—10.

12. Герасимов Л. В., Карпун Н. А., Пирожкова О. С.Избранные вопросы патогенеза и интенсивного лечения тяжелой сочетанной травмы.Общая реаниматология.2012; 8 (4): 111—117.

13. Герасимов Л. В., Саморуков В. Ю., Мороз В. В., Иванова Г. П.Применение эритропоэтина у больных с травмой и кровопотерей.Общаяреаниматология.2012; 8 (5): 11—18.

14. Berezina T. L., Zaets S. B., Morgan C., Spillert C. R., Kamiyama M., Spolarics Z., Deitch E. A., Machiedo G. W.Influence of storage on red blood cell rheological properties.J. Surg. Res.2002; 102 (1): 6—12.

15. Мороз В. В., Черныш А. М., Козлова Е. К., Сергунова В. А., Гудкова О. Е., Федорова М. С., Кирсанова А. К., Новодержкина И. С.Нарушение наноструктуры мембран эритроцитов при острой кровопотере и их коррекция перфторуглеродной эмульсией.Общая реаниматология.2011; 7 (2): 5—9.

16. Мороз В. В., Голубев А. М., Черныш А. М., Козлова Е. К., Васильев В. Ю., Гудкова О. Е., Сергунова В. А., Федорова М. С.Изменения структуры поверхности мембран эритроцитов при длительном хранении донорской крови.Общая реаниматология.2012; 8 (1): 5—12.

17. Коденев А. Т., Ващенко Г. А., Капустов В. И., Жибурт Е. Б.Качество эритроцитов, криоконсервированных при умеренно низких температурах.Вестн. службыкровиРоссии.2010; 1: 23—27.

18. Bessis M.Atlas of red blood cell Shapes. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag; 1974: 21 — 101.

19. O&#8217;ConerВ. Н.A color atlas and instruction manual of peripheral blood cell morphology. Baltimor, USA; 1984: 316.

20. Рагимов А. А., Соловьева И. Н.Экстракорпоральные методы в транс-фузиологии.Клин. медицина.2005; 83 (4): 4—8.

21. Connes P., Boucher J. H.Echinocytosis in athletes with exercise-induced hypoxemia.Clin. Hemorheol. Microcirc.2010; 44 (2): 107—114.

22. Кидалов В. Н., Сясин Н. И., Хадарцев А. А.К вопросу о физиологической значимости изменений формы, ультраструктуры и флуоресценции эритроцтовпереферической крови, трансформирующихся в эхиноциты.Вестн. новых мед. технологий.2005; 12 (2): 6—9.

23. Козинец Г. И., Шишканова З. Г., Сарычева Т. Г.Клетки крови и костного мозга: атлас. М.: Медицинское информационное агентство; 2004: 203.

24. Berling C., Lacombe C., Lelrnvre J. C., Allary M., Saint-Blancard J.The RBC morphological dependence of the RBC disaggregability.Biorheology.1988; 25 (5): 791—798.

25. Meiselman H. J. In vivocirculatory correlates of altered RBC aggregation.Biorheology.2002; 39 (5): 636.

26. Schmid-Schonbien H.Blood rheology and oxygen transport to tissues.Adv. Physiol. Sci.1982; 25: 279—289.

27. Cabrales P.Effects of erythrocyte flexibility on microvascular perfusion and oxygenation during acute anemia.Am. J. Physiol. Heart Cire. Physiol.2007; 293 (2): H1206—H1215.

28. Cheung A. T., Miller J. W., Miguelino M. G., To W. J., Li J., Lin X., Chen P. C., Samarron S. L., Wun T., Zwerdling T., Green R.Exchange transfusion therapy and its effects on real-time microcirculation in pediatric sickle cell anemia patients: an intravital microscopy study.J. Pediatr. Hematol. Oncol.2012; 34 (3): 169—174.

29. Hu H., Xenocostas A., Chin-Yee N., Lu X., Chin-Yee I., Feng Q.Transfusion of fresh but not old stored blood reduces infarct size and improves cardiac function after acute myocardial infarction in anemic rats.Crit. Care Med.2012; 40 (3): 740—746.

30. Викулов А. Д., Осетров И. А., Мельников А. А.Активность Na, К-АТ-Фазы эритроцитов у физически активных лиц.Физиологиячеловека.2001; 27 (3): 129—132.

31. Wong P.The basis of echinocytosis of the erythrocyte by glucose depletion.Cell Biochem. Funct.2011; 29 (8): 708—711.

32. Bennett-Guerrero E., Veldman T. H., Doctor A., Telen M. J., Ortel T. L., Reid T. S., Mulherin M. A., Zhu H., Buck R. D., Califf R. M., McMahon T. J.Evolution of adverse changes in stored RBCs.Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2007; 104 (43): 17063—17068.

33. Атауллаханов Ф. И., Витвицкий В. М., Княткин А. Б.Регуляция объема эритроцитов человека. Роль калиевых каналов, активируемых кальцием.Биофизика.1998; 38 (5): 809—822.